临床医学检验技术(师)

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《检验技师》精选复习笔记二

 脑脊液PH检查

  正常脑脊液PH 为7.13-7.34,比动脉血的 Ph 低。目前认为二氧化碳易通过血脑屏障,使脑脊液PCO2 比动脉血高0.5-1.5kpa(4-11mmHg) ,而HCO3-不易通过血脑屏障,脑脊液中浓度一般比动脉血低。

  脑脊液PH 比较恒定,即使全身酸碱失衡时对它的影响也甚小,在中枢神经系统炎症时脑脊液PH 降低,比脓性脑膜炎的脑脊液的PH 降雨量低更明显。如同时测定脑脊液的乳酸含量则更有价值。

  前列腺液检查项目

  (1)酸性磷酸酶含量。酸性磷酸酶主要来源于前列腺,它的含量与锌浓度成正相关。在患前列腺癌时,二者显著增高。因此,酸性磷酸酶的含量可作为诊断、治疗、追踪随访前列腺癌的客观指标。

  (2)锌离子浓度。前列腺是身体中含锌量最高的组织之一,前列腺液中的锌浓度也很高。前列腺能合成具有抗菌作用的含锌多肽,故锌的含量与前列腺液杀菌能力及抗菌机制有关。慢性前列腺炎时,锌浓度由正常时的480微克/毫升左右降至148微克/毫升左右。当射精管阻塞呈无精症时,精液内锌浓度显著增高,这是因为前列腺液在精液中的比例显著增加所致。

  (3)酸碱度。正常情况下,前列腺液略偏酸性,但也有的实验室报告略偏碱性,pH值范围大约在6.7~7.3之间。前列腺液的pH值随年龄的增长而碱性增强。当出现炎症时,pH值可增加到7.7~8.5.(4)枸橼酸浓度。枸橼酸的分泌受雄激素的控制与调节。枸橼酸水平与锌浓度成正相关(即一个增加时,另一个也成比例地增加)。正常时枸橼酸浓度为19毫克/毫升左右,前列腺炎患者下降为6.4毫克/毫升左右。

 胃粘膜内的腺体

  胃是消化道最膨大的部分,上接食管,下连十二指肠。胃被分为贲门部、胃认错、胃体及幽门四部分。胃壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜组成。不同部位的胃粘膜结构有异分泌功能也不全相同。发解胃粘膜的结构,对掌握胃各种分泌功能的帮助。粘膜内的腺体有:

  ①胃底腺:遍布于胃体和胃底,含有粘液颈细胞、胃酶细胞主细胞和壁细胞其分泌物为胃液的主要成都成分。主细胞分泌胃蛋白酶原,壁细胞分泌盐酸,又称盐酸细胞。壁细胞与内因子有关,恶性贫血病人常出现壁细胞萎缩现象。壁细胞在胃内分布很广,也存在于贲门腺和幽门腺中,但以胃底腺内含量最大。

  ②贲门腺位于贲门部粘膜内,主要分泌细胞为粘液细胞,但也含有壁细胞等。

  ③幽门腺位于幽门部,主要为粘液细胞,此外还有壁细胞及多种内分泌细胞。其中G细胞分泌胃泌素,有刺激胃酸分泌之作用,是调节胃酸妥泌的一种主要内泌素。

  脑脊液蛋白质定量

  【脑脊液方法学评价】比浊法经磺基水杨酸和三氯乙酯为基础,在国内应用较广,但受白蛋白/球蛋白的比值变化而影响结果,同时还受加试剂的手激动、速度、室温和放置时间等影响,而且脑脊液用量相对较大。加一类是染料结合法、如考马斯亮蓝、丽春红S、邻苯三酚红钼法等,具有灵敏度较高,标本用量少,重复性好等优点,但对PH要求较严格。

  【参考值】脑脊液蛋白质的参考值因年龄和标本来源不同而有差异,成人腰池的蛋白质为200-400mg/L,脑池蛋白质为100-250mg/L,脑室内的蛋白质为50-150mg/L.新生儿由于血脑屏障尚不完善。因此脑脊液蛋白质含量相对高些,6个月后小儿脑脊液中的蛋白质相当于成人水平。

  【临床意义】脑脊液蛋白质含量增加,提示患者血脑屏障受破坏,常见于脑、脊髓及脑膜炎的症、肿瘤、出血等以及脑软化、脑退化性疾病、神经根病变和引起脑脊液循环梗阻的疾病等,当脑脊液中蛋白质在10g/L以上时,流出后呈黄色胶冻状凝固,而且还有蛋白-细胞分离现象,临床上称为 Froin综合征,是蛛网膜下腔梗阻性脑脊液的特征。

  含血的脑脊液可使蛋白质含量增加,为鉴别原来有无蛋白质增加,可用每微升升个红细胞的相当增加蛋白质80mg/L来推算,最后用含血的脑脊液中实测的蛋白质量减去出血时从血中带入的蛋白质量由含红细胞数推算成的蛋白质量,即为原来脑脊液的蛋白质含量。

 抗原抗体反应

  将抗原(标准品和受检标本)、标记抗原和抗血清按顺序定量加入小试管中,在一定的温度下进行反应一定时间,使竞争抑制反应达到平衡。不同质量的抗体和不同含量的抗原对温育的温度和时间有不同的要求。

  如受检标本抗原含量较高,抗血清的亲和常数较大,可选择较高的温度(15~37℃)进行较短时间的温育,反之应在低温(4℃)作较长时间的温育,形成的抗原抗体复合物较为牢固。

  抗血清的检定

  含有特异性抗体的抗血清是放射免疫分析的主要试剂,常以抗原免疫小动物诱发产生多克隆抗体而得。抗血清的质量直接影响分析的灵敏度和特异性。抗血清质量的指标主要有亲和常数、交叉反应率和滴度。

  1.亲和常数亲和常数(affinityconstant)常用K值表示。它反映抗体与相应抗原的结合能力。K值的单位为mol/L,即表示 1mol抗体稀释至若干L溶液中时,与相应的抗原结合率达到50%.抗血清K值越大,放射免疫分析的灵敏度、精密和准确度越佳。抗血清的K值达到 109~1012mol/L才适合用于放射免疫分析。

  2.交叉反应率放射免疫分析测定的物质有些具有极为类似的结构,例如甲状腺素的T3、T4,雌激素中的雌二醇、雌三醇等。针对一种抗原的抗血清往往对于其类似物会发生交叉反应。

  因此交叉反应率反映抗血清的特异性,交叉反应率过大将影响分析方法的准确性。交叉反应率的测定方法为用与抗血清相应抗原及其类似物用同法进行测定,观察置换零标准管50%时的量。以T3抗血清为例,置换零标准50%T3为1ng,其类似物T4则需 200ng,则其交叉反应率为:1/200=0.5%.

  3.滴度滴度系指将血清稀释时能与抗原发生反应的最高稀释度。它反映抗血清中有效抗体的浓度。在放射免疫分析中滴度为在无受检抗原存在时,结合50%标记抗原时抗血清的稀释度。

免疫荧光原理

  免疫学的基本反应是抗原-抗体反应。由于抗原抗体反应具有高度的特异性,所以当抗原抗体发生反应时,只要知道其中的一个因素,就可以查出另一个因素。免疫荧光技术就是将不影响抗原抗体活性的荧光色素标记在抗体(或抗原)上,与其相应的抗原(或抗体)结合后,在荧光显微镜下呈现一种特异性荧光反应。

  直接法:将标记的特异性荧光抗体,直接加在抗原标本上,经一定的温度和时间的染色,用水洗去未参加反应的多余荧光抗体,室温下干燥后封片、镜检。

  间接法:如检查未知抗原,先用已知未标记的特异抗体(第一抗体)与抗原标本进行反应,用水洗去未反应的抗体,再用标记的抗抗体(第二抗体)与抗原标本反应,使之形成抗原—抗体—抗体复合物,再用水洗去未反应的标记抗体,干燥、封片后镜检。如果检查未知抗体,则表明抗原标本是已知的,待检血清为第一抗体,其它步骤的抗原检查相同。

  标记的抗抗体是抗球蛋白抗体,同于血清球蛋白有种的特异性,如免疫抗鸡血清球蛋白只对鸡的球蛋白发生反应,因此,制备标记抗体适用于鸡任何抗原的诊断。

  免疫荧光技术特点

  该技术的主要特点是:特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是:非特异性染色问题尚未完全解决,结果判定的客观性不足,技术程序也还比较复杂。

  荧光免疫法按反应体系及定量方法不同,还可进一步分做若干种。与放射免疫法相比,荧光免疫法无放射性污染,并且大多操作简便,便于推广。国外生产的TDM用试剂盒,有相当一部分即属于此类,并且还有专供TDM荧光偏振免疫分析用的自动分析仪生产。

  由于一般荧光测定中的本底较高等问题,荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。新发展了几种特殊的荧光免疫测定,与酶免疫测定和放射免疫分析一样,在临床检验中应用。

尿液化学成分检查项目之一

  尿液蛋白为尿液化学成分检查中最重要的项目之一。正常人的肾小球滤液中存在小分子量的蛋质,在双月刊牢牢曲小管时绝大部分又被重吸收,因此终尿中的蛋白质含量很少,仅为30-130mg/24h.随机一次尿中蛋白质为0.80mg/L.尿蛋折定性试验呈阴性反应。

  当尿液中蛋白质超过正常范围时称为蛋白尿,含量大于0.1g/L时定试验可阳性。正常时分子量在7万以上的蛋白质不能通过肾小球滤过膜,而分子量1-3万的低分子蛋白质虽大多可通过滤过膜,但又为近曲小管重吸收,由于肾小管细胞分泌的蛋白如TammHorsfall蛋白(T-H蛋白)、SigA等以及下尿路分泌的粘液蛋白可进入尿中。

  尿蛋白质 2/3来自血浆蛋白,其中白蛋白约占40%其余为小分子量的酶(溶菌酶等、)肽类、激素类先进,如将正常人尿液浓缩后再经免疫电泳,可按蛋白质的分子量量大小分成以下3组:

  ①高分子量蛋白质:分子量大于9万,含量极微,包括由肾髓袢升支极及远曲小管上皮细胞分泌的T-H糖蛋白及分泌型IGA等;

  ②中分子量蛋白质:分子量4-9万,是以白蛋白为主的血浆蛋白,可占尿蛋月总数的1/2-2/3;③低分子量蛋白质:分子量小于4万,绝大多数已在肾小管重吸收。因此尿中含量极少,如免疫球蛋白FC片段,游离轻链、α1微球蛋白、β2微球蛋白等。

  荧光色素

  许多物质都可产生荧光现象,但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。常用的荧光色素有:

  1.异硫氰酸荧光素(fluoresceinisothiocyanate,FITC)为黄色或橙黄色结晶粉末,易溶于水或酒精等溶剂。分子量为 389.4,最大吸收光波长为490——495nm,最大发射光波长520——530nm,呈现明亮的黄绿色荧光,结构式如下:有两种同分异结构,其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性、与蛋白质结合能力等方面都更好,在冷暗干燥处可保存多年,是应用最广泛的荧光素。其主要优点是:①人眼对黄绿色较为敏感,②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。

  2.四乙基罗丹明(rhodamine,RIB200)为橘红色粉末,不溶于水,易溶于酒精和丙酮。性质稳定,可长期保存。结构式如下:最大吸收光波长为570nm,最大发射光波长为595~600nm,呈橘红色荧光。

  3.四甲基异硫氰酸罗丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate,TRITC)结构式如下:最大吸引光波长为 550nm,最大发射光波长为620nm,呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合,但荧光效率较低。

 [尿酸度参考值] 随机尿PH4.6-8.0,多数标本为5.5-6.5,平均为6.0;正常尿可滴定酸度为10-15mmol/L,20-40mmol/24h.

  [尿酸度临床意义]

  1.尿PH降低:酸中毒、慢性肾小球肾炎、痛风、糖尿病等排酸增加;呼吸性酸中毒,因二氧化碳潴留等,尿多呈酸性。

  2.尿PH升高频繁呕吐丢失胃酸、服用重碳酸盐、尿路感染、换气过度及丢失二氧化碳过多的呼吸性碱性中毒,尿呈碱性。

  尿主PH一般与细胞外液PH谈化平行,但应注意:①低钾血症性碱中毒时,由于肾小管分泌H+增加,尿酸性增强;反之高钾酸性中毒时,排K+增加,肾小管分泌H+减少,可呈酸性尿;②变形杆菌性尿路感染时,由于悄素分解成氨,呈碱性尿;③肾小管性酸中毒时,因肾小管形成H+排出H+及H+、Na+交换能力下降,尽管体内为明显酸中毒,但尿PH呈相对偏于碱性。酸负荷试验即给病人酸负荷后,精确测定尿PH值,有助于肾小管性酸中毒的诊断及分型。

  功能性蛋白尿及体位性蛋白尿

  1.功能性蛋白尿(tunctionalproteinuria)指机体在剧烈运动、发热、低温刺激、精神紧张、交感神经兴奋等所致的暂时性、轻度性的蛋白尿。其形成强制可能与上述原因造成肾血痉挛或充血而使肾小球毛细积压管壁的通透性增加所致当诱发因素消失时,尿蛋白也迅速消失。生理性蛋白尿定性一般不超过(+)定量小于0.5g/24h,多见于青少年期。

  2.体位性蛋白尿(posturalproteinuria)又称直立性蛋白尿(orthostatic proteinuria),指由于直立体位或腰部前突时引起的蛋白尿。其特点为卧床时尿蛋白定性为阴性,起床活动若干时间后即可出现蛋白尿,尿蛋白定性可达(2+)甚至(3+),而平卧后又转成阴性,常见于青少年,可随年龄增长而消失。此种蛋白尿了生机制可能与直立时前突的脊柱压迫肾静脉,或直立位时肾的位置向下移动,使肾静脉扭曲而致肾脏处于瘀血状态,淋巴、血流受阻有关。

肾小球性蛋白尿形成原因

  肾小球因受到炎症、毒素等的损害,引起肾小球毛细血管壁通透性增加。滤出较多的血浆蛋白,超过了肾小管重吸收能力所形成的蛋白尿,称为肾小球性蛋白尿。

  形成蛋白尿的机制除肾小球滤过膜的物理性空间构型改变导致“孔径”增大外,还与肾小球滤过膜的各层特别是足突细胞层的唾液酸减少或消失,以致静电屏障作用减弱有关。

  蛋白电泳检查漏出的蛋白质中白蛋白约占70-80%,β2微球蛋白可轻度增多。此型蛋白尿中尿蛋白含量常大于2g/24h,主要见于肾小球疾病如急性肾小球肾炎,某些继发性肾脏病变如糖尿病性肾病,免疫复合物病如斑狼疮性肾病等。此外,功能性蛋白尿体位性蛋白尿产生的机制也与此相关。

  指示剂法测尿酸度

  指示剂法均易受黄疸尿、血尿的干扰而影响结果判断。PH精密试纸法优于广泛试纸法,优于广泛试纸法更优于石蕊试纸法,但由于试纸法吻吸潮变质,目测不易准确而使结果判断受到人为影响。

  故目前多采用甲基红与溴麝香草酚蓝适量配合制成PH试纸垫,以仪器自动化检测,来反映尿PH5-9的变异范围,基本能满足临床对尿PH测定的需的。

  PH计法电极法中然精确度很高,但需要特殊仪器且操作繁琐,一般很少应用。在肾小管性酸中毒的定位诊断分型、鉴别诊断时,对酸碱负荷后的尿液应用PH计进行精确PH测定。

白血病实验室检查分类

  1.急性白血病:

  ①贫血程度轻重不一,但进展迅速,多数为白细胞增多型,常大于10×109/L。亦可正常或减低,周围血白细胞分类可见幼稚型白细胞,血红蛋白常小于70g/L;②骨髓增生活跃,原始细胞(原粒细胞Ⅰ型+Ⅱ型)大于30%,有核细胞显著增生,可见白血病“裂孔出象”,红系、巨核系统显著减少;③通过化学染色、溶菌酶测定,染色体及免疫学检查对急性白血病的诊断、分类都有一定意义。

  2.慢性白血病:

  ①白细胞计数增高,可达几万,数十万以上,以中、晚幼稚细胞为主,嗜酸、嗜碱性粒细胞增多,红细胞和血红蛋白随病情进展逐渐减少,血小板早期增多,晚期减少;

  ②骨髓呈极度增生,分类与血象大致相同,原始细胞(Ⅰ型+Ⅱ型)小于10%,红系减少,巨核细胞系早期增多,可伴有程度不同的骨髓纤维化;

  ③90%以上具有特异性的ph标记染色体。

  检验医学发展现状

  1.检验人员结构和素质发生了变化 新中国成立50多年来,我国的医学检验教育同其它各项事业一样,也有很大发展。由20世纪50年代初期首先在中专卫生学校开设医学检验专业,培养初、中级医学检验人才,到1983年在高等医学院校首次设置医学检验专业本科教育,培养了大批高层次的医学检验人才,彻底改变了过去检验科以中专生为主的学历结构。

  目前,全国共有27所院校设有医学检验专业,有3个博士点和17个硕士点,每年毕业的学生上千人。近20年来,高等医学检验教育在国内经历了创业、发展、壮大的历程,在学科定位、人才培养模式和培养目标等方面的框架已基本形成,围绕整个培养目标所构建的课程体系和实施的教学内容、教学方式等也有一些定式,现已形成培养目标明确,具有普通检验本专科、硕士和博士研究生(医学科学学位)、本硕连读七年制(医学专业学位)、成人检验本专科、高职检验本专科等层次齐全、形式多样的教育体系。在岗的检验人员也逐步通过成人教育达到了专科和本科学历,人员素质得到了普遍提高。

  2.质量控制管理体系逐步趋于完善 我国的质控管理虽然起步较晚,但某些学科如临床生化已形成了较合理的质量控制体系,“全程质量管理”的概念近年来在检验界倍受重视。分析前质控、分析中质控及分析后质控都有了一定的发展,保证了结果的准确性和可比性。

  3.设备和技术得到发展 随着改革开放的深化,经济实力的增强以及与国外技术交流和信息沟通加快,促进了检验仪器的大量引进和运用,使医学检验实现了自动化、微量化、标准化,结果更加快速、客观、准确,提高了工作效率。同时,随着新技术的发展和方法学的改进,新的检测项目不断增多,原来无法测定的项目得到了准确测定,以疾病为中心,以人体器官为中心的检验组合项目的综合运用,广范围、多角度地为临床提供了丰富的诊断信息。

 红细胞代偿性增生的检查

  1.网织红细胞增多在5%~20%以上。

  2.外周血出现幼红细胞,主要是晚幼红细胞。由于网织红细胞及幼红细胞的出现,故可表现大红细胞增多。

  3.骨髓幼红细胞显著增生,以中幼红和晚幼红细胞增生为主,粒红比例常发生倒置。

  外周血细胞检验的注意点

  1.血液标本的采集

  血液标本的采集,可分为毛细血管采血法和静脉采血法。DETA-K2抗凝剂对血细胞形态影响很小,因此适用于血细胞计数,特别是血小板计数。血细胞分析仪使用标本一般要求为静脉抗凝血,为了避免淤血和浓缩,压脉带压迫时间不可过长,最好不超过半分钟。因为毛细血管标本,受末梢血循环状态、采血技术的影响,有时血液易形成小凝块,堵塞机器造成实验结果偏差。

  2.血细胞分析仪计数

  血液标本在室温中必须6 h内上机检测,上机前一定要将血液标本颠倒混匀至少8次,如需制备血涂片,应在采血后3 h内涂制。无论多先进的血液分析仪,只能当作一种过筛手段,不能完全替代目视法显微镜镜检,因为仪器还不能准确区分幼稚细胞、异常淋巴细胞、有核红细胞等。因此,当出现白细胞、红细胞及血小板明显升高或降低,白细胞分类出现异常结果,白细胞、红细胞及血小板直方图或散点图出现异常,均应用显微镜涂片复查。

  3.血涂片的制备

  血涂片既可由非抗凝的静脉血和毛细血管血制备,也可由 DETA-K2抗凝血制备,EDTA-K2抗凝血中,钙离子被螯合后,能阻止血小板聚集,推片时血小板均匀平均,显微镜下易于对血小板进行观察评价,但有时可观察到因EDTA-K2引起的红细胞皱缩及白细胞丛集现象,因此最好使用非抗凝血制备涂片,这样可减少因抗凝剂所致的人工假象。涂片的好坏与血滴大小、推片与载片之间角度有关;血膜分布不均,主要是推片边缘不齐,用力不均或载玻片不清洁所致,将制成的血膜在空气中挥动,使迅速干燥,以免血细胞皱缩。

  4.血涂片的染色

  瑞氏-姬姆萨混合染色,两种染色法各有其优缺点,故在细胞学检查中常将两者结合起来,取长补短,细胞的胞质、颗粒、核等染色均较满意;染色环境的pH对着色影响很大,应维持在pH值6.4~6.8,因此必须使用缓冲液;未干透血膜不能立即染色,否则染色时易脱落。

  5.血涂片的镜检

  选择血涂片的体尾交界处染色良好的部分,在油镜下按一定方式有规律地移动视野,一般计数100个~200个白细胞,同时注意白细胞、红细胞、血小板形态的改变和分布,有无血液寄生虫、有核红细胞、幼稚或原始细胞、异淋细胞等。