临床医学检验技术(士)

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原发性骨髓纤维化的检验

1、外周血象白细胞数增多,一般在(10~20)×109/L,亦有患者呈减少状态。75%以上的患者有不同程度的贫血,一般是轻度至中度的正细胞性正色素性贫血,网织红细胞数正常。血小板数变化较大,增多、正常和降低各占病例数的1/3.但随病程的进展血细胞数逐渐减少。血细胞形态异常尤其是泪滴状红细胞为本病的重要特征。80%的患者外周血中出现有核红细胞,多数为晚幼红细胞,少数为中幼红和早幼红细胞。也可见幼稚粒细胞,多数为晚幼粒和中幼粒细胞,少数为早幼粒和原粒细胞;10~30%的患者嗜酸和嗜碱粒细胞增多。也可见到巨大血小板和巨核细胞碎片。中性粒细胞碱性磷酸酶积分增高是本病与慢性粒细胞白血病鉴别的依据之一。

2、骨髓象和骨髓活检“干抽”是本病骨髓穿刺的典型表现,穿刺不易成功。抽取标本片中常见大量纤维性的索状物和成团聚集的血小板。骨髓象,早期无特殊;后期80%的患者增生低下,但幼稚细胞和巨核细胞常增多,多部位穿刺可见灶性骨髓增生。

骨髓活检是确诊本病的重要方法。几乎所有患者均可见纤维组织增生和残存的造血灶,且随病情的进展,纤维组织逐渐增多而造血灶逐渐减少。

3、肝、脾、淋巴结活检和穿刺见到髓外造血,尤其是巨核细胞,还有网硬蛋白。

4、染色体异常发生率为41%.C组染色体有复制,Ph1阳性少见,此与慢性粒细胞白血病不同。

5、线检查半数患者有典型X线表现,骨质呈广泛性或局限性增生,表现为毛玻璃样变化。骨髓腔变狭,骨皮质增厚。30~70%的患者好发于股骨、骨盆、肱骨、脊椎、桡骨、胫骨、肋骨和锁骨等。一般膝关节以下病变较少见,颅骨仅偶尔累及。

6、其他半数患者中性粒细胞碱性磷酸酶大多增高;血清白蛋白降低。血沉增快、血清尿酸及血、尿溶菌酶增高等。血清免疫球蛋白(尤其IgA)降低。出现多克隆免疫球蛋白(47%),单克隆免疫球蛋白(10%)。此外,可有抗核抗体和抗平滑肌抗体阳性,类风湿因子阳性,抗人体球蛋白试验阳性等。

寄生虫感染的初步诊断

1.询问病史

应详细了解患者的居住地、旅行史、生活行为方式、饮食习惯、感染史、治疗史等。对于长江以南的血吸虫病流行区患者,如有相应的症状和体征应考虑到血吸虫病;我国加入WTO后,大量频繁的人口流动也会带来某些输入性病例(im portedcases);阴道毛滴虫感染多见于性行为不洁的个体;生食淡水鱼虾有感染肝吸虫的可能;与猫密切接触的孕妇如有不良妊娠结局应警惕弓形虫的感染等。

2.物理诊断

对于某些病原检查不易确诊,而病理变化又具有一定特征的患者,可采用物理检查方法。除了认真体检,注意寄生虫病的特征性表现外,还可辅以各种影象学诊断。例如棘球蚴病的囊性肿大、弓形虫脑炎、血吸虫肝硬化、胆道蛔虫症等可用CT、MRI、超声波或胆道造影等。

真菌检验生物学技术

(一)、用PCR等技术字标本中扩增真菌DNA.国内应用PCR与反向斑点杂交快速检测及鉴定念珠菌主要种别。国外可以用PCR-DEIA技术从血清中扩增出白色念珠菌的DNA来诊断念珠菌病。

针对真菌的共同序列而设计的‘全能引物’(pan-primer)而扩增580bp的产物,为真菌所共有。检测血液标本即可明确体内有无真菌感染。

(二)、用于真菌的型别分析。国内应用随机引物PCR扩增后进行真菌分型,结果可靠。应用随机引物扩增物多态性分析(RAPD)可以将5种曲霉菌鉴别开(烟、黄、黑、土、构巢曲霉)。国外结合PCR与酶标记探针在纸条上进行检测(LiPA,lineprobeassay)可鉴别出主要的致病性真菌。

(三)、检出念珠菌的基因变异快速确定念珠菌对酮康唑的耐药性。此种耐药性由基因的1554T突变为C而致,应用Lightcycler仪器,以荧光共振能量转移和基因片段溶解温度曲线技术测定。

慢性淋巴细胞鉴别诊断

【诊断及鉴别诊断】

外周血成熟淋巴细胞绝对值(>6×109/L)持续增高而无其他原因解释者,应高度怀疑本病,在较长时间(>3月)观察下仍高或继续升高。骨髓增生明显活跃,成熟淋巴细胞≥40%,伴有进行性淋巴结肿大,则可确诊。

需与慢淋鉴别的疾病

一、淋巴瘤

慢淋后期淋巴结结构消失,与小淋巴细胞性淋巴瘤不能区别。目前一般概念认为两者实际上是一种病的两个方面。肿瘤细胞侵犯血液和骨髓时即为慢淋,只侵犯淋巴结而血液和骨髓未受影响者即为小淋巴细胞型淋巴瘤,淋巴瘤细胞白血病系指小淋巴细胞型淋巴瘤(分化好淋巴细胞型淋巴瘤,低度恶性非霍奇金淋巴瘤)以外的其他类型淋巴瘤的骨髓侵犯。

二、幼淋巴细胞白血病

其病程较慢淋短,临床以巨脾、无或有轻度淋巴结肿大,白细胞总数显著增高,以幼淋巴细胞占优势,其细胞较慢淋细胞为大,核仁明显,对化疗反应差等与慢淋不同。

三、毛细胞白血病

有全血细胞减少,脾大、淋巴结肿大不常见,骨髓常出现干抽,瘤细胞比慢淋细胞大,胞浆丰富,表面有头发丝状突起可与慢淋区别。

血小板黏附率测定

【正常参考值】

成人:0.21~0.32; 儿童:0.17~0.30.

【临床意义】

1.血小板黏附率增高:见于冠心病、糖尿病、脑血栓形成、高脂血症、多发性硬化症、雷诺症、高血压、静脉血栓形成、肥胖症、痛风症等。

2.血小板黏附率降低:见于白血病、尿毒症、肝硬化、再生障碍性贫血、假性血友病、血小板无力症等。

体外血栓形成测定

【正常参考值】

1.血栓长度

男:98.1~22.3mm; 女:14.4~25.6mm.

2.血栓湿重

男:54.0~93.3mg; 女:70.4~100.2mg.

3.血栓干重

男:15.5~29.3mg; 女:25.7~31.6mg.

【临床意义】 体外血栓增加表明有形成静脉或动脉血栓的倾向,见于心肌梗塞、心绞痛、脑血栓形成、深静脉血栓形成、高脂血症、动脉粥样硬化、高血压、糖尿病、急慢性肾炎、大叶性肺炎、渗出性胸膜炎及某些恶性肿瘤等。

嗜酸性粒细胞参考值

【正常参考值】

百分率:0.005~0.05(0.5%~5%);

绝对数: (50~300)×106/L.

【临床意义】

1.增多:

(1)变态反应:如支气管哮喘、荨麻疹、食物过敏、热带嗜酸性粒细胞增多症、过敏性肺炎、神经血管性水肿等。

(2)某些皮肤病:如牛皮癣、湿疹、疱疹样皮炎、霉菌性皮肤病等。

(3)某些寄生虫病:如钩虫病、肺吸虫病、包囊虫病、血吸虫病、丝虫病、绦虫病等。(4)某些血液病:如慢性粒细胞白血病、何杰金病等。

(5)其他:如猩红热、溃疡性结肠炎、X线照射后、脾切除、传染病恢复期等。

2.减少:

(1)伤寒、副伤寒及其他感染早期。

(2)应激状态及应用肾上腺皮质激素或促肾上腺皮质激素时。

 人体大脑的形态

(1)分叶大脑左右半球成,三沟表面五叶分;额枕顶颞与脑岛,重要中枢在各叶。

(2)大脑皮质功能定位

旁小叶前与前回,运动中枢四六区;

旁小叶后与后回,感觉中枢一二三;

对侧管理要知道,倒立人影要记清。

听中枢在颞横回,四十一二两区域;

视中枢是十七区,枕叶内面距状沟;

四十四区布洛卡,运动语言中枢区;

大脑内面穹窿回,内脏活动切相关。

(3)基底核

尾豆屏状基底核,尾豆合称纹状体;

尾状核壳新纹状,旧纹状体苍白球。

(4)内囊

尾背与豆夹内囊,投射纤维经此穿;

水平切面侧X字,前脚后脚膝部分。

后脚穿经束较多,前部皮质脊髓束;

中部丘脑顶叶束,视听辐射最后通。

膝部皮质脑干束,内囊损伤三偏症。

细胞免疫效应简介

细胞免疫是抗肿瘤免疫的重要机制,参与抗肿瘤免疫的细胞主要有:T细胞、NK细胞、巨噬细胞、树突状细胞(DC)等。

1.T细胞:

T细胞应答是控制肿瘤生长发育的最重要的宿主应答。

参与抗肿瘤免疫的两类T细胞亚群:

(1)CD8+细胞毒性T细胞(CTL),受MHC-I类抗原限制。

(2)CD4+辅助性T细胞(TH0),受MHC-Ⅱ类抗原限制。

(3)CD8+CTL杀伤肿瘤细胞的机制:

①通过其抗原受体识别肿瘤细胞上的特异性抗原,并在Th细胞的辅助下活化后直接杀伤肿瘤细胞;

②活化的CTL可分泌淋巴因子如γ干扰素、淋巴毒素等间接地杀伤肿瘤细胞。

CD4+T杀伤肿瘤细胞的机制:产生淋巴因子增强CTL的功能,激活巨噬细胞或其他APC,产生肿瘤坏死因子发挥溶瘤作用。

2.NK细胞:

(1)具有广谱杀伤肿瘤细胞的作用。

(2)无肿瘤特异性和MHC限制性。

(3)直接杀伤肿瘤细胞。

(4)通过ADCC作用杀伤IgG包裹的肿瘤细胞。

(5)NK细胞杀伤肿瘤的能力可被细胞因子所增强,包括干扰素,肿瘤坏死因子和白细胞介素-2。

(6)是一类在肿瘤早期起作用的效应细胞,是机体抗肿瘤的第一道防线。

LAK细胞:外周血淋巴细胞在IL-2存在下,经4~5天培养后,诱导出的一种新的杀伤细胞,具有广谱杀伤肿瘤细胞的作用。

3.巨噬细胞:

(1)作为抗原提呈细胞;

(2)杀伤肿瘤效应细胞;

(3)巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的机制;

(4)活化的巨噬细胞与肿瘤细胞结合后,通过释放溶解细胞酶直接杀伤肿瘤细胞;

(5)处理和呈递肿瘤抗原,激活T细胞以产生特异性抗肿瘤细胞免疫应答;

(6)巨噬细胞表面上有Fc受体,可通过特异性抗体介导ADCC效应杀伤肿瘤细胞;

(7)活化的巨噬细胞可分泌肿瘤坏死因子(TNF)等细胞毒性因子间接杀伤肿瘤细胞。

4.树突状细胞:是一类专职抗原提呈细胞,其极强的抗原提呈作用,辅助T、B细胞参与特异性杀伤肿瘤的过程。

慢性髓系细胞检查

初诊时以外周血计数增高为主,一般>25×109/L,约一半患者>100×109/L,可见各阶段幼稚粒细胞,原粒一般约占3%,早幼粒约占4%,中、晚幼粒细胞约占40%,分叶核粒细胞约占35%.嗜酸和嗜碱粒细胞常增高。成熟形态仅有轻度改变,表现为大小不均,网织计数正常或轻度增高。初诊时约50%的患者有血小板计数增高,在病程中血小板>1000×109/L者并非少见。淋巴细胞绝对值常增高(平均为15×109/L),主要是T淋巴细胞增高,B淋巴细胞数正常。骨髓常为极度增生,粒系:为10:1~30:1,红系增生减低,嗜碱、嗜酸粒细胞常增高,可见Gaucher细胞样巨噬细胞和海兰细胞,巨核细胞数常增高。骨髓活检病理切片银染常示网状纤维增生,约一半患者为显著增生。90%以上的患者中性粒细胞碱性或磷酸酶活性减低或缺如,尿酸水平常为正常人的2~3倍,血清VitB12结合蛋白常增高,血清乳酸脱氢酶也常增高,在病程中可出现钙血症和低钾血症。急变期患者的血象和骨髓象与急性白血病相同。

典型的CML伴有脾肿大,外周血数增高,可见各阶段幼稚细胞,嗜酸和嗜碱粒细胞增高。骨髓增生明显或极度活跃,以粒细胞系增生为主,中性晚幼及杆状核粒细胞明显增生,嗜酸和(或)嗜碱粒细胞亦增多,巨核细胞系常增生。中性粒细胞必磷酸酶积分(ALP)减低。细胞遗传学检查Ph染色体或应用分子生物学方法检测出BCR-ABL基因重排或融合,诊断并不困难。

CML主要需与由感染、炎症或转移瘤等引起的反应性白细胞增高或类白血病和类红白血病反应鉴别诊断。

CML确诊后为了下一步选择合适的治疗方案尚需进一步分型,分期和分组。

血象及骨髓象特点

(1)血象:血红蛋白、红细胞均减少,以血红蛋白减少更为明显。轻度贫血时红细胞形态无明显异常,中度以上贫血时红细胞体积减小,中心淡染区扩大,严重时红细胞可呈环状,并有嗜多色性红细胞及点彩红细胞增多。网织红细胞轻度增多或正常。白细胞计数及分类一般正常。血小板计数一般正常。

(2)骨髓象:增生明显活跃。粒红比值减低。红细胞系明显增生,以中、晚幼红细胞为主。幼红细胞体积小,边缘不规整,胞核小而致密,胞浆量少,因血红蛋白合成不足而着色偏碱。成熟红细胞体积小,中心淡染区扩大,严重时可呈环状红细胞。易见嗜多色性红细胞。粒细胞系相对减少,但各阶段比例及细胞形态大致正常。巨核细胞系正常。

散射比浊法是指一定波长的光沿水平轴照射,通过溶液使遇到抗原抗体复合物粒子,光线被粒子颗粒折射,发生偏转,光线偏转的角度与发射光的波长和抗原抗体复合物颗粒大小和多少密切相关。散射光的强度与复合物的含量成正比,即待测抗原越多,形成的复合物也越多,散射光也越强。散射光的强度还与各种物理因素,如加入抗原或抗体的时间、光源的强弱和波长、测量角度等密切相关。

(一)散射颗粒与散射光

悬浮在反应溶液中的分子,无论是固体或胶体粒子都可以是散射中心,当入射光通过时,如果颗粒直径比入射光的波长小很多,则散射光的分布比较均匀,称为Rayleigh散射。如果颗粒直径接近于入射光的波长,则散射光的分布明显不均匀,称为Mile散射。

(二)反应物含量与散射浊度

抗原抗体结合反应中,遵守典型的Heidelberger曲线,即当抗体量恒定时,抗原与抗体结合,形成免疫复合物的反应与散射信号响应值的上升呈正比。

血块收缩试验:

(1)原理:在富含血小板血浆中加入Ca2+和凝血酶,使血浆凝固形成凝块,血小板收缩蛋白使血小板伸出伪足,伪足前端连接到纤维蛋白束上。当伪足向心性收缩,使纤维蛋白网眼缩小,测定析出血清的体积可反映血小板血块收缩能力。

(2)参考范围:血块收缩率48%~64%.

(3)临床意义:

1)减低:见于原发性血小板减少性紫癜、血小板增多症、血小板无力症、红细胞增多症、低(无)纤维蛋白原血症、多发性骨髓瘤、原发性巨球蛋白血症等。

2)增高:见于先天性(遗传性)因子XⅢ缺乏症等。